阿法替尼(afatinib)afatinib和TMZ组合医治可降低细胞增殖-

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摘要

  已知 EGFRvIII 可增加癌细胞的增殖、存活和调节治疗反应。我们通过蛋白质印迹分析验证了 EGFR、EGFRvIII 和 EGFRvIII DK 在 U

  已知 EGFRvIII 可延长癌细胞的增殖、存活和调节医治反应。我们通过蛋白质印迹分析验证了 EGFR、EGFRvIII 和 EGFRvIII DK 在 U87MG 和 U251 细胞中的表达。,并通过 MTT 法分析增殖率。与之前的报告一致 ,我们观察到与亲本 U87MG、EGFR 和 EGFRvIII DK 过表达细胞相比,U87EGFRvIII 细胞的增殖显着延长(p < 0.0001)。。为了分析 TMZ 和阿法替尼(afatinib)对 GBM 的细胞毒作用,U87MG 和 U87EGFRvIII 细胞用不同浓度的 TMZ(10-500 μM)或阿法替尼(afatinib)(0.25-5.0 μM)处置 48-72 小时,并通过 MTT 法进行分析。在 TMZ 和阿法替尼(afatinib)医治后观察到 GBM 细胞活力的剂量依赖性减少。TMZ(替莫唑胺(temozolomide))的 25% (IC 25) 值抑制浓度约为 25 μM 和 300 μM,而阿法替尼(afatinib)(afatinib)对 U87MG 和 U87EGFRvIII 细胞的抑制浓度区别为 2 μM 和 1 μM。最近,对 35 名 GBM 患病者的药代动力学分析显示,大约 10–25 μM 浓度的 TMZ 高达脑脊液 (CSF) 因此,为了模拟体内条件,我们在所有体外实验中使用了 25 μM TMZ 和 1 μM 阿法替尼(afatinib)。因此,我们的 CI 图显示,在 U87EGFRvIII 细胞中,阿法替尼(afatinib)与 TMZ 联用后,细胞活力出现了额外且近乎协同的减少。

  集落形成测定显示,与载体处置的对照细胞相比,阿法替尼(afatinib)和 TMZ 均显着减少了 GBM 细胞 U87MG、U87EGFR WT、U87EGFRvIII 和 U87EGFRvIII DK 的克隆形成性。在 U87MG、U87EGFR WT 和 U87EGFRvIII DK 细胞中,TMZ 比阿法替尼(afatinib)更能抑制集落形成,而 U87EGFRvIII 细胞则相对耐受药物。然而,阿法替尼(afatinib)与 TMZ 联合使用消除了 U87EGFRvIII 细胞的集落形成能力。与载体处置的对照相比,TMZ (p= 0.01)、阿法替尼(afatinib) (p= 0.03) 和 TMZ 加阿法替尼(afatinib) (p= 0.01)的 U87MG 细胞集落形成百分比降低 96.3 ± 0.3、58 ± 6.2、98.4 ± 0.7, 区别。与对照组相比,TMZ、阿法替尼(afatinib)和联合组的 U87 EGFR WT 集落形成降低百分比区别为 66.5 ± 1.8、41.4 ± 1.9 和 80.5 ± 1.2 (p= 0.001),区别。U87EGFRvIII 比 U87MG、U87EGFR WT 和 U87EGFRvIII DK 细胞形成更大的集落。

  同样,与对照组相比,TMZ-、阿法替尼(afatinib)-和联合医治组由 U87EGFRvIII 形成的菌落平均百分比降低区别为 89.6 ± 3.0、56.6 ± 7.0 和 94.5 ± 0.6。此外,与单独使用 TMZ (p= 0.048) 或阿法替尼(afatinib) (p= 0.005) 相比,阿法替尼(afatinib)加 TMZ 显着降低 EGFRvIII
阿法替尼(afatinib)afatinib和TMZ组合医治可降低细胞增殖-
菌落。与对照组相比,TMZ( p= 0.02)、阿法替尼(afatinib)(p = 0.02)和联合组(p = 0.01)的 U87EGFRvIII DK 集落形成百分比区别为 85.0 ± 2.3、78.3 ± 1.5 和 95.3 ± 0.3 (p = 0.01)总体而言,与单独使用 TMZ 相比,联合医治显着减少了 U87MG、U87EGFR WT 和 U87EGFRvIII 集落生长(p= 0.01)。对于 U251 和 U251EGFRvIII GBM 细胞观察到类似的结果(数据未显示)。

  我们分析了阿法替尼(afatinib)是否能够阻断 U87EGFRvIII 细胞的锚定非依赖性生长,因为 EGFRvIII 在癌细胞增殖中起重要作用,而锚定非依赖性生长可预测体内致瘤性。TMZ 显着减少了 U87MG、U87EGFR WT 和 U87EGFRvIII DK 中的集落大小以及集落数量,而 TMZ 对 EGFRvIII 细胞的影响较小。TMZ 单独或与阿法替尼(afatinib)联用也显着降低了 U87MG 小菌落 (p= 0.03) 和大菌落 (p= 0.02) 的数量。TMZ 和阿法替尼(afatinib)区别显着减少了 U87EGFR WT 大集落的数量(p= 0.05),而 TMZ 和阿法替尼(afatinib)联用显着降低了小菌落 (p = 0.03) 和大菌落 (p = 0.03) 的数量。

  阿法替尼(afatinib)或联合医治显着降低了 U87EGFRvIII 小 [(阿法替尼(afatinib)(p = 0.02);联合 (p = 0.01)] 和大菌落 (阿法替尼(afatinib)(p = 0.02);联合 (p = 0.01)) 的数量。TMZ 或阿法替尼(afatinib)或联合医治显着降低U87EGFRvIII DK小菌落数(p = 0.03),而TMZ和联合医治显着降低大菌落数量[TMZ(p= 0.048);联合医治(p= 0.038)]。总体而言,联合医治无论 EGFR 的激活状态怎样,阿法替尼(afatinib)医治都完全消除了 GBM 细胞的不依赖贴壁的生长。更多详情可咨询下方【微信:yaodaoyaofang】。

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